Священномученик Тимофей родился в 1875 году в городе Симферополе Таврической губернии в семье садовника Спиридона Изотова. Образование он получил в церковно-приходской школе. Трудно теперь установить, почему Тимофей избрал путь служения Богу, но в 1909 году, когда ему было уже тридцать четыре года, он поступил псаломщиком в кафедральный собор в Симферополе. В 1912 году за беспорочную жизнь и усердие по службе Тимофей Спиридонович был рукоположен во диакона и служил в кафедральном соборе. В 1916 году он был назначен в аутскую церковь города Ялты, а в 1921 году переведен в храм Всех святых в городе Симферополе.
В 1922 году диакон Тимофей был арестован по обвинению в сопротивлении изъятию церковных ценностей. В обвинительном документе власти писали: «Духовенство всячески старалось противодействовать изъятию, затягивало работу, отказываясь помочь снять ризы с икон и ссылаясь на принадлежность последних прихожанам, но оправдательных документов не представило».
Диакон Тимофей был обвинен «в соучастии в сокрытии церковных ценностей и ведении пассивной обороны против изъятия». Однако «за недостатком улик» дело было прекращено, и он был освобожден.
В 1928 году диакон Тимофей был рукоположен во священника ко храму села Ново-Павловка. В сентябре 1936 года он был переведен служить в храм великомученика Феодора Стратилата в город Алушту, где и сподобил его Господь принять крест исповедничества.
Зимой 1938 года власти сделали попытку расколоть церковную общину, уговорив некоторых людей уйти из нее, но община не распалась, и храм закрыть не удалось. Тогда 8 февраля 1938 года помощник оперуполномоченного районного отделения НКВД выписал постановление на арест священника, и в тот же день отец Тимофей был арестован. Все следственное дело было проведено за три дня. Следователь спросил священника:
— Вы арестованы за проводимую вами контрреволюционную деятельность и контрреволюционную агитацию, направленную против советской власти. Вы признаете это?
— Нет, я этого не признаю, так как я контрреволюционной работы не проводил.
— Квартира церковной старосты служила для вас подпольной церковью, где вы совершали религиозные обряды: крещение детей, отправляли молебны и так далее. Вы подтверждаете это?
— Подтверждаю, квартира церковной старосты действительно являлась церковью на дому, где я совершал крещение детей, но других треб я не совершал...
— 19 января 1938 года по окончании обедни вы вышли в церкви на амвон... Вы говорили: «Граждане прихожане, из нашей религиозной двадцатки ушли некоторые члены... они продались антихристу и хотят подорвать нашу общину, но это им не удастся. Я думаю, что верующие прихожане не допустят развалить нашу общину». Вы подтверждаете это?
— 19 января 1938 года я действительно вышел после обедни на амвон и, обращаясь к прихожанам, сказал: «Прихожане, из нашей двадцатки ушли некоторые члены... они хотят подорвать нашу общину, в них вселился дьявольский дух, дьявол делает свое дело, но это им не удастся, община существовать будет. Надо пополнить двадцатку, у меня есть пять человек, желающих записаться в двадцатку, но они скажут сами народу».
— Обвиняемый Тимофей Спиридонович Изотов, признаете ли вы себя виновным в совершенном вами преступлении, что вы, используя свое положение служителя религиозного культа, проводили контрреволюционную агитацию, направленную против советской власти, и контрреволюционную деятельность в церкви?
— Я совершал на дому у церковной старосты религиозные требы: крещение детей — и призывал народ не слушать продавшихся дьяволу членов двадцатки, желавших развалить нашу религиозную общину. В остальном виновным себя не признаю.
— 12 декабря 1937 года, в день выборов в Верховный Совет СССР, вы, как служитель религиозного культа, с целью сорвать выборы целый день проводили религиозную службу, отвлекая этим избирателей. Вы признаете это?
— Я действительно служил в день выборов 12 декабря 1937 года, но делал это не с целью сорвать выборы в Верховный Совет СССР, а по своим обязанностям...
Арестованный священник содержался в камере предварительного заключения при Алуштинском отделении милиции. Как и в древности во время гонений, христиан обвиняли в преступлениях против государства. Священник Тимофей Изотов был обвинен в том, что он будто бы «создал контрреволюционную группу из членов церковной двадцатки... проводил контрреволюционную религиозную пропаганду с целью вовлечения населения в религиозную общину. В день выборов в Верховный Совет... с шести утра до поздней ночи проводил богослужение в церкви».
15 февраля 1938 года тройка НКВД приговорила его к расстрелу. Священник Тимофей Изотов был расстрелян в городе Симферополе и погребен в общей безвестной могиле.